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外泌体的提取方式:
1、离心法:此种方法得到的外泌体量多,但是纯度不足。
2、过滤离心:这种操作简单、省时,不影响外泌体的生物活性,但同样纯度不足。
3、密度梯度离心法:用此种方法分离到的外泌体纯度较高,外泌体电镜检测,但是前期准备工作繁杂
4、免1疫磁珠法:这种方法可以保证外泌体形态的完整,特异性高、操作简单,但生理性盐浓度会影响外泌体生物活性。
5、色谱法:此种方法分离出的外泌体大小均一,但设备特殊,应用不广泛。
外泌体的基本信息:1983年,外泌体首1次于绵羊网织红细胞中被发现,1987年Johnstone将其命名为“exosome”,即外泌体。
人体几乎所有类型的细胞都能分泌外泌体,外泌体广泛存在并分布于各种体液中,携带多种蛋白质、mRNA、miRNA和脂质类物质等,作为重要的传递信号分子,形成了一种全新的细胞-细胞间信息传递系统,可参与细胞通讯、细胞迁移、血管新生和肿1瘤细胞生长等过程。
据国际细胞外囊泡学会(ISEV)在2014年的提议,外泌体鉴定3个标志:透射电镜(transmission electron microscope,TEM)、粒径(Nanoparticle Tracking Analysis, NTA)、蛋白标志物(Western Blot, WB)。
外泌体透射电镜TEM鉴定外泌体大小、形态,判断样本是否含有外泌体。
外泌体透射电镜分辨率为0.1~0.2nm,适合外泌体双层囊膜超微结构观察,可观测样本中是否存在外泌体样结构(通常为茶托型或一侧凹陷的半球形),同时可测量外泌体大小。
检测平台:TecnaiTM G2 Spirit BioTWIN
检测结果:三张透射电镜图片,尽可能体现完整的外泌体形态(如有)
检测周期:10-15个工作日